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—— 中國食品雜志社
采用半巢式PCR技術建立了食品中痕量及微量轉(zhuǎn)基因大米成分的檢測方法。根據(jù)大米內(nèi)源SPS基因以及轉(zhuǎn)基因大米Bt63含有的外源Cry1A(b)/Cry1A(c)融合基因和Btc基因,分別設計了6對普通與半巢式PCR引物。擴增結(jié)果顯示,針對理論DNA濃度的檢測靈敏度,普通PCR擴增靈敏度為1ng/μl左右,半巢式PCR擴增靈敏度達到10-3～10-4ng/μl,半巢式PCR比普通PCR方法提高了103～104倍;在質(zhì)量百分比的檢測靈敏度方面,普通PCR方法擴增靈敏度在0.1%～1%之間,半巢式PCR方法的檢測靈敏度能夠達到0.001%～0.01%,半巢式PCR比普通PCR方法要提高10倍以上。在實際樣品的檢測中,速凍湯圓、嬰兒米粉及芝士小圓餅等食品經(jīng)普通PCR擴增,其內(nèi)源SPS基因條帶模糊或未擴增到,進一步采用半巢式PCR擴增后,能夠得到清晰明亮的特異性條帶。所有樣品均未擴增到外源Cry1A(b)/Cry1A(c)和Btc基因。
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