領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：克隆表達(dá)雞蛋主要過(guò)敏原Gal d 3 基因并檢驗(yàn)其免疫活性。方法：提取雞蛋的總RNA，采用RTPCR方法擴(kuò)增出目的基因片段，將其克隆入T 載體中進(jìn)行測(cè)序和分析。設(shè)計(jì)帶有酶切位點(diǎn)的特異性引物，采用RTPCR獲得整個(gè)短的開放閱讀框并將目的基因克隆到大腸桿菌表達(dá)載體pET-28a 中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。通過(guò)Ni2+ 親和層析柱對(duì)重組蛋白進(jìn)行純化，采用免疫印跡(Western blotting)方法檢測(cè)其IgE 結(jié)合活性。結(jié)果：克隆獲得了雞蛋主要過(guò)敏原Gal d 3。基因開放閱讀框?yàn)?118 個(gè)堿基(包括終止密碼子)，編碼705 個(gè)氨基酸。該序列編碼的蛋白等電點(diǎn)為6.5，相對(duì)分子質(zhì)量約為76000。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)親和層析純化，用Western blotting 方法檢測(cè)免疫學(xué)活性，目的蛋白具有良好的免疫原性。結(jié)論：成功地克隆和表達(dá)了雞蛋主要變應(yīng)原Gal d 3 基因，該蛋白具有良好的免疫原性。
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