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抗萊克多巴胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的建立及其免疫學(xué)特性鑒定
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 187 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 張海棠,王自良,鄧瑞廣,鐘 華,范國(guó)英
關(guān)鍵詞: 萊克多巴胺|半抗原|人工抗原|單克隆抗體|免疫學(xué)特性
摘要:

萊克多巴胺(RAC)經(jīng)化學(xué)修飾引入功能基團(tuán)羧基,合成半抗原RAC- 戊二酸酐半醛化合物(RAC-SA),用混合酸酐法(MA)將RAC-SA 偶聯(lián)于牛血清白蛋白(BSA),合成人工抗原BSA-RAC,用紅外(IR)、紫外(UV)和凝膠電泳(SDS-PAGE)對(duì)其進(jìn)行鑒定;用BSA-RAC免疫Balb/C 小鼠,細(xì)胞融合技術(shù)建立抗RAC的單克隆抗體(RAC mAb)雜交瘤細(xì)胞株,體內(nèi)誘生腹水法制備RAC mAb,并鑒定其免疫學(xué)特性。結(jié)果表明,BSA-RAC 偶聯(lián)成功,偶聯(lián)率為24.5:1;篩選出3F10、3H12、4D8 共3 株雜交瘤細(xì)胞,其中最好的4D8 株間接ELISA 效價(jià)細(xì)胞培養(yǎng)上清為1:1.28 × 103,腹水為1:6.4 × 105,同種型為IgG1/κ,親和常數(shù)(Ka)為1.65 × 1010L/mol,對(duì)RAC 的半數(shù)抑制濃度(IC50)為5.7ng/ml,與多巴酚丁胺的交叉反應(yīng)率(CR)為22.3%,與其他化合物無(wú)CR。

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