領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：構(gòu)建抗克倫特羅單鏈抗體(scFv)基因cbl，進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)模擬并對(duì)其理化特性進(jìn)行分析。方法：采用重疊延伸PCR 方法，以能特異性分泌抗克倫特羅mAb 的雜交瘤細(xì)胞株5D1 為原料，構(gòu)建抗克倫特羅scFv 基因cbl，進(jìn)行測(cè)序，采用生物信息軟件對(duì)氨基酸序列推導(dǎo)并進(jìn)行結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)，同時(shí)對(duì)理化性質(zhì)進(jìn)行分析。結(jié)果：抗克倫特羅scFv 基因cbl 全長(zhǎng)720bp，對(duì)應(yīng)225 個(gè)氨基酸，單鏈抗體分子量約為25826.6，等電點(diǎn)預(yù)測(cè)值8.78，為堿性蛋白質(zhì)；二級(jí)結(jié)構(gòu)顯示抗克倫特羅單鏈抗體含α螺旋20 處，β折疊99 處，β轉(zhuǎn)角28 處，隨機(jī)卷曲93 處。cbl 三級(jí)結(jié)構(gòu)建模顯示重鏈(VH)和輕鏈(VL)形成一個(gè)疏水的" 口袋"，Linker 游離于此結(jié)構(gòu)之外，符合scFv 的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，明顯具有抗原結(jié)合位點(diǎn)的空間構(gòu)象，理論上應(yīng)該具有良好的抗原結(jié)合活性。結(jié)論：構(gòu)建一個(gè)抗克倫特羅scFv 基因cbl，應(yīng)用信息學(xué)技術(shù)所獲得的預(yù)測(cè)和分析結(jié)果為抗克倫特羅單鏈抗體的進(jìn)一步表達(dá)、純化和活性研究提供信息。
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