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—— 中國食品雜志社
為準確快速地鑒定黃牛、水牛和牦牛的成分，研發(fā)具有這3 種牛特異性的引物和探針，并建立單重、雙重和三重實時聚合酶鏈式反應（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）方法，同步檢測上述3 種牛的成分。單重real-time PCR檢測時，3 種牛的檢測靈敏度均為0.025 ng/μL；雙重real-time PCR檢測時，兩兩組合的引物探針含量比例為1∶1時，黃牛的檢測靈敏度降低至0.1 ng/μL，而水牛和牦牛仍為0.025 ng/μL；對三重real-time PCR檢測體系進行優(yōu)化，當黃牛、水牛和牦牛3 組引物探針的含量比例為3∶3∶2時，檢測靈敏度最佳，黃牛和水牛的檢測靈敏度可達到0.1 ng/μL，而牦牛的靈敏度仍可達到0.025 ng/μL。但上述雙重和三重real-time PCR檢測的靈敏度，是建立在3 種牛的含量比例為1∶1∶1的情況下，若3 種牛的比例差異較大，特別是黃牛和牦牛的含量比例差異較大時，如比例為9∶1時，含量低的成分會存在漏檢。因此，在對整塊肉的樣品進行檢測時，可采用三重real-time PCR的方法同步檢測3 種牛的成分；若樣品可能為上述3 種肉的為混合物，如肉糜、肉松等，則建議采用單重real-time PCR檢測。
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