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孔雀石綠單克隆抗體的制備及直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法的建立
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 150 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 李曉麗,陳雪嵐,劉春梅,熊勇華
關(guān)鍵詞: 孔雀石綠|單克隆抗體|直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA
摘要:

通過(guò)合成羧基化孔雀石綠,采用活潑酯法制備孔雀石綠免疫抗原CMG-BSA、檢測(cè)抗原CMG-OVA。采用CMG-BSA 免疫 BALB/c 小鼠,經(jīng)融合、篩選和克隆化獲得了一株穩(wěn)定的抗孔雀石綠單克隆抗體,并建立了檢測(cè)孔雀石綠的直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA 方法。ELISA 方法的最佳操作參數(shù):孔雀石綠抗體稀釋倍數(shù)1:16000(1mg/ml),酶標(biāo)抗原(CMG-HRP)使用質(zhì)量濃度0.2μg/ml。該方法具有良好的靈敏度和特異性,IC50 值0.3ng/ml,最低檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.05ng/ml,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程為y =- 20.888x + 81.423(R2 = 0.9813)。

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