領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：通過(guò)研究甲基導(dǎo)向錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)（methyl-directed mismatch repair，MMR）主要調(diào)控基因缺陷對(duì)食源性沙門(mén)氏菌高頻突變子突變頻率和環(huán)丙沙星藥敏性的影響，揭示其調(diào)控機(jī)制。方法：采用萘啶酮酸和利福平平板測(cè)定90 株食源性沙門(mén)氏菌高頻突變子的突變頻率；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)結(jié)合DNA測(cè)序法檢測(cè)耐藥基因突變；瓊脂稀釋法測(cè)定環(huán)丙沙星對(duì)沙門(mén)氏菌高頻突變子的最小抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC），確定MMR缺陷與沙門(mén)氏菌高頻突變子突變頻率、MIC及耐藥基因間的關(guān)系；通過(guò)電轉(zhuǎn)化法將野生mutS、mutH、mutL和uvrD基因分別轉(zhuǎn)入高頻突變子103D2，采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法測(cè)定野生型基因轉(zhuǎn)入前后103D2耐藥相關(guān)基因表達(dá)差異，分析MMR基因缺陷對(duì)沙門(mén)氏菌高頻突變子環(huán)丙沙星耐藥性的影響及調(diào)控機(jī)制。結(jié)果：90 株沙門(mén)氏菌高頻突變子中共有89 株對(duì)環(huán)丙沙星耐藥，49 株MutS編碼基因發(fā)生突變（MutS－），且相較于MutS非突變株，在MutS突變株中GyrA（67.3%）及ParC（87.8%）蛋白突變檢出率更高。103D2轉(zhuǎn)入野生型mutS、mutH、mutL 及uvrD基因質(zhì)粒后，103D2:P-mutS突變頻率顯著下降，103D2:P-mutL和103D2:P-uvrD突變頻率極顯著下降。4 株互補(bǔ)菌株中marA基因顯著下調(diào)，marR、tolC（除103D2:P-uvrD外）基因上調(diào)，降低103D2對(duì)環(huán)丙沙星耐藥性。結(jié)論：MMR缺陷可通過(guò)影響外排泵和膜編碼基因marA、marR和tolC的表達(dá)改變對(duì)沙門(mén)氏菌高頻突變子的耐藥性及突變頻率產(chǎn)生影響。
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