領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
分別以R. miehei 3.4960基因組和總RNA為模板，通過PCR和RT-PCR擴(kuò)增得到脂肪酶全長基因和脂肪酶cDNA堿基序列，兩堿基序列測序結(jié)果比對表明：脂肪酶DNA堿基序列由5個(gè)內(nèi)含子和6個(gè)外顯子組成，5個(gè)內(nèi)含子大小分別為75、58、64、73、59bp，位于DNA序列(以起始密碼子ATG的堿基A為1)的600～674位、929～986位、1076～1139位、1227～1299位、1382～1440位堿基處。脂肪酶RML mRNA堿基序列與已公布的R. miehei脂肪酶基因mRNA(EMBL Nucleotide Sequence Database Accession No. A02536)堿基序列有5個(gè)堿基的差異，其編碼的氨基酸序列有1個(gè)發(fā)生了改變。利用釀酒酵母表達(dá)質(zhì)粒pICAS1，實(shí)現(xiàn)了脂肪酶RML基因在釀酒酵母中的高效分泌表達(dá)，并對重組脂肪酶RML進(jìn)行了相關(guān)酶學(xué)性質(zhì)分析。酶學(xué)性質(zhì)研究表明：重組酶的最適反應(yīng)溫度為45℃，最適pH值為8.6；該酶偏愛中鏈長的酯(C8～C12)，對12個(gè)碳的酯具有最佳活性，對C16長鏈酯也有較高的活性，對短鏈酯的活性較弱；金屬離子Cu2+、Fe2+對酶活性有顯著抑制作用，Ca2+和Mg2+對酶活有部激活作用。
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