領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：結(jié)合多種酵母菌鑒定方法，分析腐敗橙汁中酵母菌的種類，為快速檢測(cè)和控制商品橙汁中酵母菌污染奠定基礎(chǔ)，也為酵母菌種類的快速鑒定提供參考。方法：以分離自腐敗橙汁的8株酵母菌株為材料，觀察菌落和細(xì)胞形態(tài)。用引物ITS1/ITS4擴(kuò)增菌株5.8S rDNA 及其ITS間隔區(qū)(5.8S-ITS)，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物用HhaⅠ、Hae Ⅲ 和 HinfⅠ進(jìn)行限制性酶切片段多態(tài)性(RFLP)分析和測(cè)序；用引物NL1/NL4擴(kuò)增26S rDNA D1/D2區(qū)并測(cè)序。結(jié)果：菌落特征觀察將菌株初分為6組，細(xì)胞學(xué)觀察粗分為3組，分子方法都分成4組。用限制性內(nèi)切酶HhaⅠ、Hae Ⅲ和HinfⅠ對(duì)5.8S-ITS區(qū)產(chǎn)物進(jìn)行 RFLP分析，觀察到4種不同的圖譜類型。5.8S-ITS 區(qū)和26S rDNA D1/D2區(qū)的序列分析結(jié)果相似，8株分離菌與GenBank中的4種酵母菌參考菌株序列一致性達(dá)99%以上。分離株與參考菌株以兩區(qū)序列構(gòu)建的NJ系統(tǒng)樹都分成4枝：Y1與克魯維畢赤酵母(Pichia kluyveri)，Y12-3、Y18-1與發(fā)酵畢赤酵母(Pichia fermentans)，Y22、Y23、Y26和Y56與Meyerozyma guilliermondii，Y47與Wickerhamomyces anomalus分別聚為一枝。結(jié)論：結(jié)合形態(tài)分析和核酸分析，將8株腐敗橙汁分離菌鑒定為P. kluyveri var. kluyveri、P. fermentans、M. guilliermondii和W. anomalus 4個(gè)種，其中M. guilliermondii在腐敗橙汁中首見報(bào)道；ITS- RFLP分析、26S rDNA D1/D2區(qū)測(cè)序與菌株形態(tài)特征結(jié)合能有效鑒定酵母菌，核糖體DNA分析可鑒定酵母到生物學(xué)種，菌落形態(tài)特征可反映種以下的遺傳差異，因此，采用分子方法鑒定時(shí)不能忽視形態(tài)特征分析的重要性。
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