領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
將熒光染料疊氮溴化丙錠(propidium monoazide，PMA)與普通聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction，PCR)結(jié)合，通過對PMA的曝光時間、濃度進(jìn)行優(yōu)化，確定PMA-PCR區(qū)別死活細(xì)胞的最佳條件，并制作活細(xì)胞定量標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立肉及肉制品中沙門氏菌活細(xì)胞的PMA-PCR檢測方法。結(jié)果表明：使插入死細(xì)胞DNA中的PMA活化并且光解溶液中游離PMA的最佳曝光時間為15min；不抑制沙門氏菌活細(xì)胞DNA擴(kuò)增的最大PMA質(zhì)量濃度為10μg/mL；完全抑制熱致死細(xì)胞DNA擴(kuò)增的最小PMA質(zhì)量濃度為4μg/mL。經(jīng)PMA處理，含有不同比例的沙門氏菌熱致死細(xì)胞和活細(xì)胞的混合液中活的沙門氏菌能夠通過PCR被選擇性的檢測，最小檢測限為20CFU/PCR。而且，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)在20～2×105CFU/PCR范圍內(nèi)，電泳條帶相對熒光強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)的對數(shù)具有線性關(guān)系。采集30份肉及肉制品樣品，利用PMA-PCR方法檢測出兩份生肉樣品中存在沙門氏菌，經(jīng)過6h的富集培養(yǎng)后的活菌濃度分別為2.5×103CFU/mL和3.4×103CFU/mL。
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