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不同來源膽鹽水解酶基因在大腸桿菌中的表達(dá)
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 131 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 楊士芹,滿朝新,曲行光,李 彬,謝鯤昊,姜毓君
關(guān)鍵詞: 膽鹽水解酶;克隆表達(dá);活性測(cè)定
摘要:

根據(jù)GenBank上報(bào)道的兩歧雙歧桿菌ATCC 29521的膽鹽水解酶基因(BSH)序列和嗜酸乳桿菌NCFM的膽鹽水解酶基因(BSHA和BSHB)序列,設(shè)計(jì)引物通過PCR擴(kuò)增獲得BSH基因,將其連接到表達(dá)載體pET28a(+),構(gòu)建pETBSH表達(dá)質(zhì)粒,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測(cè)表明在分子質(zhì)量大小約40、43、45kD處有預(yù)期條帶出現(xiàn),初步表明蛋白表達(dá)成功。重組菌產(chǎn)生的膽鹽水解酶水解甘氨膽酸鈉產(chǎn)生的甘氨酸經(jīng)茚三酮比色法分析,表明該重組的膽鹽水解酶具有水解活性。

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