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—— 中國食品雜志社
鏈霉菌來源的谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶(microbial transglutaminase，MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表達(dá)，需要蛋白酶將其活化。蛋白酶有降解MTG及其底物的可能，且增加MTG的分離純化成本。為解決上述問題，將一種pH值依賴型的內(nèi)含肽(intein)插入pro區(qū)和MTG之間，用以介導(dǎo)二者之間的斷裂，實(shí)現(xiàn)MTG的pH值控制活化。結(jié)果表明：重組蛋白(pro-Intein-MTG)在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了可溶高表達(dá)。在pH7.0、25℃的體外環(huán)境下，重組蛋白經(jīng)24h即可完全轉(zhuǎn)化為MTG，且最高酶活力為0.23U/mL(菌體濃度稀釋至OD600nm為1.0時測得)。重組型MTG的酶比活力和Km值分別為14.3U/mg、69.4mmol/L，與野生型MTG相近；且圓二色譜顯示二者具有相似的二級結(jié)構(gòu)，說明內(nèi)含肽的插入對于MTG的功能和結(jié)構(gòu)無顯著影響。
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