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TaqMan探針雙重熒光PCR法檢測副溶血性弧菌
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 158 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 許龍巖,袁慕云,曹際娟,凌 莉
關(guān)鍵詞: 副溶血性弧菌;toxR基因;tdh基因;TaqMan探針;雙重熒光聚合酶鏈式反應(yīng);檢測;食品
摘要:

目的:建立同時檢測副溶血性弧菌(VP)和其毒力基因的方法。方法:根據(jù)VP的toxR基因和tdh基因,分別設(shè)計引物和探針,建立基于TaqMan探針雙重熒光聚合酶鏈式反應(yīng)擴增體系,進行特異性、敏感性實驗,并用建立的方法檢測從廣東地區(qū)和遼寧地區(qū)進出口食品中分離的VP菌株的毒力基因分布情況。結(jié)果:VP標準菌株和3株從食物中毒病人中分離株均出現(xiàn)toxR基因和tdh基因擴增曲線,而31株包括溶藻弧菌、單增李斯特菌等弧菌屬和腸桿菌科的菌株擴增結(jié)果呈陰性;敏感性實驗結(jié)果表明,VP濃度與Ct值有很好的反向的線性關(guān)系,toxR和tdh線性方程的R2分別為0.999、0.997,最低檢測濃度達到3.6×102CFU/mL ;檢測食品中分離的37株VP只出現(xiàn)toxR基因擴增曲線,未見tdh基因擴增曲線,表明37株VP分離株均未帶tdh毒力基因。結(jié)論:建立的方法特異性好、靈敏度高,可用于食品中VP的特異性及毒力基因檢測。

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