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植物乳桿菌NP_785232蛋白N端兩個(gè)特定結(jié)構(gòu)域在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)
來(lái)源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 160 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 張 虹，都立輝，施榮華，劉 琴
關(guān)鍵詞: 植物乳桿菌；NP_785232蛋白；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；誘導(dǎo)表達(dá)；純化
摘要:

以植物乳桿菌KLDS1.0320的候選表面黏附蛋白NP_785232為研究對(duì)象，采用外源重組表達(dá)的方法大量制備其前兩個(gè)結(jié)構(gòu)域。應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)方法克隆NP_785232蛋白N端的前兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，將克隆獲得的片段連入表達(dá)載體pET30a中構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a/N2，該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌后，用終濃度為1 mmol/L的異丙基硫代半乳糖苷誘導(dǎo)重組菌，重組蛋白經(jīng)HisTrap柱純化后進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，對(duì)電泳獲得的目的大小的片段進(jìn)行質(zhì)譜鑒定。結(jié)果表明：獲得的重組蛋白與NP_785232蛋白N端的前兩個(gè)結(jié)構(gòu)域完全相同。通過(guò)大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)可以有效表達(dá)植物乳桿菌KLDS1.0320的候選表面黏附蛋白NP_785232 N端的前兩個(gè)結(jié)構(gòu)域。

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