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—— 中國食品雜志社
采用同源克隆、反轉錄聚合酶鏈式反應（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）、融合引物嵌套PCR（fusion primer and nested integrated PCR，F(xiàn)PNI-PCR）與3’-cDNA末端快速擴增（rapid amplificationof cDNA end，RACE）技術相結合，從油橄欖（Olea europaea）中克隆得到苯丙氨酸解氨酶（phenylalanineammonia lyase，PAL）基因全長，命名為OePAL。序列分析表明，OePAL的DNA全長2 970 bp（GenBank登錄號KJ511867），含一個內含子（393～1 220 bp）；全長cDNA有2 142 bp（GenBank登錄號KJ511868），開放閱讀框編碼713 個氨基酸，與其他植物有較高的同源性。利用該基因構建重組質粒pPICZα A-OePAL，且在畢赤酵母X33中進行誘導表達。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）檢測顯示該重組酶的分子質量在77.5 kD左右，純化后的酶比活力為196.3 U/mg。酶學性質研究表明：該重組酶的最適反應條件為40 ℃，pH 8.8；在供試范圍內Cu2+與Na+可以提高該酶活性；以L-苯丙氨酸為底物，在最適條件下該酶的Km為4.89×10－4 mol/L。結果表明成功地克隆到OePAL，構建了表達載體，并進行了功能驗證。
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