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雜合抗菌肽MgJ基因在畢赤酵母中表達(dá)條件的優(yōu)化
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 144 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 尹 佳
關(guān)鍵詞: 雜合抗菌肽MgJ;畢赤酵母;表達(dá)條件優(yōu)化
摘要:

為確定雜合抗菌肽MgJ基因的最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件,將構(gòu)建好的重組表達(dá)載體pPICZαA-MgJ經(jīng)SacⅠ線性化處理,電轉(zhuǎn)入巴斯德畢赤酵母GS115,利用抗生素Zeocin篩選陽性克隆,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chainreaction,PCR)擴(kuò)增驗證,甲醇誘導(dǎo)表達(dá)。優(yōu)化雜合抗菌肽MgJ誘導(dǎo)劑濃度、誘導(dǎo)時間、誘導(dǎo)溫度、初始菌體濃度表達(dá)條件。結(jié)果表明雜合抗菌肽MgJ的最佳表達(dá)條件為:28 ℃、250 r/min誘導(dǎo)培養(yǎng),每24 h添加體積分?jǐn)?shù)0.5%的甲醇,誘導(dǎo)時間120 h,MgJ表達(dá)量可達(dá)11.9 mg/L。純化后獲得的表達(dá)產(chǎn)物MgJ對S. aureus ATCC 29213有較好的抑菌活性,最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)為10 μg/mL。

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