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鴨肝乳酸脫氫酶的分離純化及部分性質(zhì)研究
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 167 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 方 玲,孫才云,唐云明
關(guān)鍵詞: 鴨肝;乳酸脫氫酶;分離純化;性質(zhì)
摘要:

新鮮鴨肝經(jīng)勻漿、磷酸鹽緩沖液抽提,乙醇和硫酸銨分級(jí)沉淀,DEAE-Sepharose離子交換層析及Superdex-200凝膠過(guò)濾層析,獲得電泳純的乳酸脫氫酶。該酶經(jīng)純化后酶比活力達(dá)到668.82 U/mg,酶活回收率為25.79%,純化倍數(shù)為185.78。該酶的全分子質(zhì)量約為170.93 kD,亞基分子質(zhì)量為44.72 kD;最適反應(yīng)溫度為45 ℃,最適pH值為7.4,在25~45 ℃及pH 5~10的范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好;在45 ℃、pH 7.4條件下,測(cè)得該酶對(duì)底物還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced form of nicotinamide-adenine dinucleotid,NADH)的Km值為3.407 μmol/L,對(duì)丙酮酸鈉的Km值為8.431 μmol/L;草酸、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、Cu2+、Ag+對(duì)該酶的抑制作用最強(qiáng),Co2+、K+對(duì)該酶有雙重作用,低濃度時(shí)有激活作用,而高濃度時(shí)具有抑制酶活性的作用。

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