領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
為了實(shí)現(xiàn)該細(xì)菌素的外源表達(dá)，本實(shí)驗(yàn)首先利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)從乳酸片球菌PAF中擴(kuò)增出乳酸片球菌素PA-1的結(jié)構(gòu)和免疫基因，然后克隆到表達(dá)載體pGEX-6p-1，構(gòu)建了N端含有GST-His-DDDDK標(biāo)簽的重組質(zhì)粒pGEX/his-pedAB，然后轉(zhuǎn)化進(jìn)入大腸桿菌Rosetta（DE3）感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷誘導(dǎo)，重組乳酸片球菌素PA-1在大腸桿菌胞內(nèi)成功表達(dá)。表達(dá)的融合蛋白先經(jīng)過鎳親合層析柱純化，然后注入谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶親和色譜柱用腸激酶處理，釋放出成熟的乳酸片球菌素PA-1。利用高效液相色譜和質(zhì)譜技術(shù)檢測(cè)乳酸片球菌素PA-1純度。以單核細(xì)胞增生李斯特氏菌CMCC54004為指示菌，利用瓊脂擴(kuò)散法檢驗(yàn)乳酸片球菌素PA-1活性。結(jié)果表明，攜帶GST-His-DDDDK標(biāo)簽的融合蛋白無活性，標(biāo)簽切除后其抑菌活性恢復(fù)，且其純度達(dá)90%以上。
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