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雙抗夾心ELISA檢測轉Bar基因抗除草劑大豆
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 237 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 李小宇,張春雨,郭東全,張淋淋,尤 晴,董英山,王永志,李啟云
關鍵詞: Bar;雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附;大豆;檢測
摘要:

為快捷有效地檢測轉Bar基因抗除草劑大豆,利用已制備的抗除草劑Bar基因編碼蛋白,膦絲菌素乙酰轉移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)單克隆抗體和多克隆抗體,建立PAT蛋白雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測方法,對轉Bar基因抗除草劑大豆不同組織材料進行定量檢測。結果顯示,最佳檢測條件為捕獲抗體質量濃度0.125 μg/mL,包被酶標板,37 ℃孵育1 h后4 ℃靜置過夜,檢測樣品37 ℃孵育1.5 h,檢測抗體質量濃度6.25 μg/mL,37 ℃孵育1.5 h;PAT蛋白的最低檢測限為0.04 ng/mL,大豆蛋白體系中為8 ng/mL;重復性變異系數(shù)小于3%。利用上述檢測條件,對實驗建立的轉Bar基因抗除草劑大豆進行PAT蛋白定量檢測,成功地在根、莖、花、葉、種子不同部位檢測到該蛋白的表達。

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