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4種鄰苯二甲酸酯塑化劑人工抗原的合成及免疫檢測
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 128 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 賴 丹,鄭盛武,趙肅清
關(guān)鍵詞: 鄰苯二甲酸酯;人工抗原;抗體
摘要:

以4-硝基鄰苯二甲酸為原料,衍生合成4 種結(jié)構(gòu)類似物,并分別通過重氮化法和活潑酯法與載體蛋白牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)偶聯(lián)制得人工抗原。利用紫外光譜掃描和十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroporesis,SDS-PAGE)檢測鑒定人工抗原,并用4 種與BSA偶聯(lián)的人工抗原作免疫原免疫新西蘭大白兔。利用酶聯(lián)免疫吸附實驗(enzymelinkedimmunosorbent assay,ELISA)檢測抗體靈敏度和特異性。經(jīng)紫外光譜和SDS-PAGE證實人工抗原偶聯(lián)成功,經(jīng)免疫分析法檢測抗體效價,4-氨基鄰苯二甲酸二丁酯-BSA(dibutyl 4-aminophthalate-BSA,DBAP-BSA)抗體效價達到1∶64 000,4-戊二單酰鄰苯二甲酸二丁酯-BSA(dibutyl 4-carboxylphthalte-BSA,DBCP-BSA)、4-氨基鄰苯二甲酸二異丁酯-BSA(diisobutyl 4-aminophthalate-BSA,DiBAP-BSA)和4-氨基鄰苯二甲酸二環(huán)己酯-BSA(dicyclohexyl 4-aminophthalate-BSA,DCHAP-BSA)抗體效價均達到1∶128 000。DBAP-BSA、DBCP-BSA、DiBAP-BSA和DCHAP-BSA分別對鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)、DBP、鄰苯二甲酸二異丁酯(diisobutyl phthalate,DiBP)和鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(dicyclohexyl phthalate,DCHP)4 種抗體的IC50值為0.305、0.268、0.104、0.247 μg/mL。四者之間交叉反應(yīng)率低,反應(yīng)特異性較好。

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