來(lái)源于古細(xì)菌嗜酸硫化葉菌( S u l f o l o b u s a c i d o c a l d a r i u s ) 的麥芽寡糖基海藻糖合成酶(maltooligosylterhalose synthase,MTSase)和麥芽寡糖基海藻糖水解酶(maltooligosyltrehalose trehalohydrolase,MTHase)聯(lián)合作用,可以利用淀粉為底物生成海藻糖。本研究構(gòu)建了6 種枯草芽孢桿菌-大腸桿菌穿梭表達(dá)載體,將密碼子優(yōu)化后的MTSase和MTHase編碼基因在木糖異構(gòu)酶基因的啟動(dòng)子及其阻遏蛋白介導(dǎo)下實(shí)現(xiàn)了在枯草芽孢桿菌中的功能表達(dá),木糖啟動(dòng)子分別來(lái)源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、巨大芽孢桿菌(Bacillusmegaterium)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。在以5 g/L甘油為碳源,24 g/L蛋白胨為氮源時(shí),菌體培養(yǎng)8 h后加入終質(zhì)量濃度為6 g/L的木糖,37 ℃誘導(dǎo)16 h后重組MTSase、MTHase產(chǎn)生聯(lián)合作用,海藻糖轉(zhuǎn)化率達(dá)到33.57%。實(shí)現(xiàn)了MTSase、MTHase在枯草芽孢桿菌中的功能表達(dá)。
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