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玉米半胱氨酸蛋白酶的真核表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì)表征
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 159 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 劉回民,陳方奇,鄭明珠,佟維娜,靳 松,劉景圣
關(guān)鍵詞: 玉米半胱氨酸蛋白酶;真核表達(dá);酶學(xué)性質(zhì)
摘要:

玉米半胱氨酸蛋白酶是一種重要的蛋白水解酶,作為C1家族蛋白酶的一員,可在食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。本研究從玉米幼苗中提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增得到玉米半胱氨酸蛋白酶基因,進(jìn)而構(gòu)建重組真核表達(dá)載體pPICZα-zmCP1,轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115構(gòu)建重組菌。對(duì)表達(dá)的玉米半胱氨酸蛋白酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究,結(jié)果表明該酶最適反應(yīng)溫度為55 ℃,最適反應(yīng)pH值為6.0,具有較好的熱穩(wěn)定性和有機(jī)溶劑抗性,但是pH值的穩(wěn)定性、金屬離子耐受性表現(xiàn)一般。底物特異性研究發(fā)現(xiàn),該酶對(duì)小分子底物具有較強(qiáng)的水解能力,且偏愛(ài)P1位點(diǎn)為精氨酸的底物。

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