為探索制備馬鹿茸降血糖肽的最佳工藝條件,以α-葡萄糖苷酶抑制率為指標(biāo),從堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中篩選出兩種酶,根據(jù)其體外降血糖效果確定酶的作用順序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白質(zhì)回收率為指標(biāo)進(jìn)行單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),優(yōu)化降血糖肽制備工藝條件。結(jié)果表明:堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更適合用于制備馬鹿茸降血糖肽。采用堿性蛋白酶-風(fēng)味蛋白酶順序?qū)︸R鹿茸進(jìn)行水解,所得酶解產(chǎn)物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白質(zhì)回收率和水解度較高,分別為21.11%、39.12%、19.88%。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定雙酶酶解最佳工藝條件為先用堿性蛋白酶在pH 8.0、60 ℃、底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)12%、加酶量5 000 U/g條件下酶解3 h,再用風(fēng)味蛋白酶于pH 6.5、45 ℃、底物質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%、加酶量6 000 U/g條件下酶解1 h。雙酶分步水解終產(chǎn)物的α-葡萄糖苷酶抑制率受質(zhì)量濃度的影響,當(dāng)質(zhì)量濃度為3 mg/mL時(shí),α-葡萄糖苷酶抑制率可達(dá)94.09%,IC50值為1.82 mg/mL。堿性蛋白酶-風(fēng)味蛋白酶雙酶分步水解馬鹿茸可獲得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。
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