領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
利用易錯(cuò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)引入隨機(jī)誘變，構(gòu)建一個(gè)Pseudoalteromonas carrageenovora芳香基硫酸酯酶 突變體庫(kù)。經(jīng)過(guò)篩選，獲得一個(gè)芳香基硫酸酯酶熱穩(wěn)定性提高的突變株4-153。序列分析表明，該突變體有2 個(gè)氨基 酸替換，包括D84A和H260L。以對(duì)硝基苯硫酸鉀為底物，突變酶4-153（M4-153）的最適反應(yīng)溫度為55 ℃，在45、 50、55、60 ℃處理30 min后，M4-153分別保留85%、83%、48%和13%的殘留酶活力。野生型酶（WT）在45、 50、55、60 ℃處理30 min后，分別保留79%、68%、21%和1%的殘留酶活力。M4-153與WT相比具有更好的熱穩(wěn)定 性。M4-153的最適反應(yīng)pH值為8.0，在pH 5.0～9.0范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。EDTA對(duì)突變酶的抑制作用表明，金屬離子在 突變酶的催化過(guò)程中起重要作用。M4-153對(duì)一些洗滌劑，包括Triton X-100、Tween 20、Tween 80和Chaps，有好的 耐受性。M4-153對(duì)龍須菜粗多糖硫酸基團(tuán)的脫硫率為79.5%。
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