領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
目的：以枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）為宿主，構(gòu)建纖維素酶基因整合表達載體，獲得能夠表達纖 維素酶并且降解纖維素的工程菌。方法：通過聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）從B. subtilis LN 基因組中克隆同源片段M1、M2基因片段，以質(zhì)粒pGEM-T為載體，將同源片段M1、M2、啟動子P43和葡萄糖苷 酶基因CelKg連接在一起構(gòu)建整合載體pGEM-Kmpgmt，并采用雙交換同源重組的方式將其轉(zhuǎn)化進入B. subtilis LN 基因組中。結(jié)果：通過PCR和雙酶切驗證整合載體構(gòu)建完成，并成功整合到野生型B. subtilis LN中，獲得重組菌 B. subtilis Kpg。剛果紅染色結(jié)果顯示重組菌對羧甲基纖維素鈉有降解作用。改良培養(yǎng)基37 ℃條件下?lián)u瓶培養(yǎng)，重組菌 B. subtilis Kpg生長至18 h時上清液中纖維素酶活力比野生型B. subtilis LN提高了115%。
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