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同源重組法構(gòu)建副干酪乳桿菌組氨酸蛋白激酶基因缺失突變株
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 131 發(fā)表時(shí)間: 2017-07-24
作者: 岳元春,王?洋,由田,高冬妮,平文祥,葛菁萍?
關(guān)鍵詞: 副干酪乳桿菌;細(xì)菌素;組氨酸蛋白激酶基因;同源重組
摘要:

構(gòu)建副干酪乳桿菌(Lactobacillus paracasei)組氨酸蛋白激酶prcK基因缺失突變株,為prcK基因功能研究提供實(shí)驗(yàn)工具。采用同源重組技術(shù)構(gòu)建質(zhì)粒pKLKRT(含prcK::Tetr基因),將其電轉(zhuǎn)化進(jìn)入L. paracasei HD1.7中,使prcK::Tetr基因同源重組到L. paracasei HD1.7的染色體上,通過(guò)四環(huán)素耐藥、氨芐青霉素敏感等特性篩選出含有prcK::Tetr基因的新L. paracasei HD1.7。結(jié)果表明,經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)驗(yàn)證及酶切驗(yàn)證后確定質(zhì)粒pKLKRT構(gòu)建成功,并成功轉(zhuǎn)化入L. paracasei HD1.7中,經(jīng)PCR確認(rèn)L. paracasei HD1.7 prcK基因缺失突變株構(gòu)建成功。該突變株產(chǎn)生的細(xì)菌素效價(jià)比出發(fā)菌株低23.61%。采用同源重組方法成功構(gòu)建L. paracasei HD1.7 prcK基因缺失突變株,為研究L. paracasei HD1.7群體效應(yīng)相關(guān)基因的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。

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