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—— 中國食品雜志社
探討雙齒圍沙蠶酶解多肽制備的關鍵技術及其對肺癌A549細胞的作用。以增殖抑制率為指標，確定最佳酶種并根據單因素試驗和正交試驗確定其最佳酶解工藝。經超濾獲得1～3?ku的酶解液，通過陰離子色譜、凝膠過濾色譜和制備色譜對其進行進一步的分離純化。采用四甲基偶氮唑藍法測定沙蠶多肽PAP對肺癌A549細胞的增殖抑制率并通過倒置顯微鏡、吖啶橙/溴化乙錠熒光染色及Hoechst熒光染色觀察其細胞形態(tài)的變化。實驗結果表明最佳酶種是堿性蛋白酶，其最佳酶解條件為：酶解溫度50?℃、pH?11、料液比1∶1（g/mL）、酶解時間6?h、加酶量300?U/g。經純化獲得的多肽命名為PAP，其氨基酸序列為Ile-Glu-Pro-Gly-Thr-Val-Gly-Met-Met-Phe，且PAP對A549細胞的作用呈時間與劑量依賴關系，作用后細胞出現了凋亡的形態(tài)學特征。因此，PAP能明顯抑制肺癌細胞A549增殖，可以誘導其發(fā)生凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。
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