領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
以右旋糖酐酶產(chǎn)生菌棘孢青霉F1001基因組為模板反轉(zhuǎn)錄合成右旋糖酐酶的cDNA（dex），基因全長1 866 bp，根據(jù)畢赤酵母密碼子偏好性優(yōu)化dex序列獲得優(yōu)化右旋糖酐酶基因（opt-dex），分別構(gòu)建dex-pPICZαA和opt-dex-pPICZαA重組質(zhì)粒，電擊轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33中構(gòu)建重組子。通過藍(lán)色右旋糖酐T-2000平板以及搖瓶發(fā)酵篩選獲得產(chǎn)右旋糖酐酶的重組酵母菌株。重組酶的酶學(xué)性質(zhì)分析顯示，重組酶分子質(zhì)量65?kDa、最適pH?5.0、最適溫度35?℃，專一作用于α-1,6糖苷鍵。在搖瓶水平上對重組畢赤酵母表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25?℃、初始pH?5.0、每24?h甲醇添加量1%（體積分?jǐn)?shù)）、每24?h山梨醇添加量5?g/L、吐溫-80添加量4?g/L、搖瓶裝液量50?mL/500?mL錐形瓶，優(yōu)化后的重組右旋糖酐酶分泌表達(dá)酶活力提高到240.74?U/mL。重組酵母X33是一株適合外源表達(dá)棘孢青霉右旋糖酐酶基因的工程菌，該重組酶可替代棘孢青霉右旋糖酐酶直接應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)催化制備右旋糖酐。
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