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極端嗜熱酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢桿菌中的高效分泌表達(dá)
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 180 發(fā)表時間: 2019-09-26
作者: 袁林,曾靜,郭建軍,郭浩,楊罡,陳俊
關(guān)鍵詞: 極端嗜熱酸性α-淀粉酶|枯草芽孢桿菌|信號肽|分泌表達(dá)|飽和突變
摘要:

為探索極端嗜熱酸性α-淀粉酶PFA在枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis WB600)中的高效分泌表達(dá)條件,對來源于枯草芽孢桿菌的9?種Sec分泌途徑信號肽進行篩選,結(jié)果顯示信號肽YfkN的引導(dǎo)分泌效率最高。在此基礎(chǔ)上,為進一步優(yōu)化PFA的分泌表達(dá),對信號肽YfkN的Ile3和Gln4進行飽和突變,并比較不同突變體的引導(dǎo)分泌效率。結(jié)果表明突變體I3G/Q4R的引導(dǎo)分泌效率最高,重組枯草芽孢桿菌的胞外α-淀粉酶活力高達(dá)715?U/mL。重組α-淀粉酶PFA的最適反應(yīng)pH值為5.0,最適反應(yīng)溫度為100?℃,于100?℃的半衰期長達(dá)13?h,并且不依賴于Ca2+。結(jié)果表明,采用信號肽I3G/Q4R,極端嗜熱酸性α-淀粉酶PFA能夠在枯草芽孢桿菌中高效分泌表達(dá),這有利于其在淀粉液化工藝中的應(yīng)用。

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