領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
利用擬南芥（Arabidopsis thaliana）蔗糖合酶AtSUS3構(gòu)建活化糖配體尿苷二磷酸葡萄糖（uridine diphosphate glucose，UDPG）再生體系，與高效催化萊鮑迪苷D（rebaudioside D，RD）合成的糖基轉(zhuǎn)移酶協(xié)同偶聯(lián)完成RD的高效生物催化。從擬南芥cDNA克隆獲得AtSUS3基因，將其裝配至pET28a獲得表達(dá)質(zhì)粒pLW105，隨后pLW105與攜帶糖基轉(zhuǎn)移酶EUGT11基因的質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）構(gòu)建雙酶共表達(dá)工程菌。在不添加UDPG或者尿核苷二磷酸（uridine diphosphate，UDP）的條件下，以上述雙酶共表達(dá)工程菌全細(xì)胞催化萊鮑迪苷A（RA）獲得的底物摩爾轉(zhuǎn)化率大于80%，RD產(chǎn)量達(dá)到930?mg/L。隨后構(gòu)建雙酶基因串連質(zhì)粒pLW108及雙酶共表達(dá)大腸桿菌BL21（DE3）工程菌。用串連質(zhì)粒構(gòu)建的工程菌催化效果與雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化相同。采用共表達(dá)雙酶工程菌的發(fā)酵破碎粗酶進(jìn)行催化，結(jié)果顯示以粗酶催化可簡(jiǎn)化催化體系，并可將細(xì)胞催化體系所需高質(zhì)量濃度蔗糖用量降至質(zhì)量濃度5 g/100 mL，同時(shí)在不添加外源UDPG的條件下實(shí)現(xiàn)RD的高效生物催化，RA底物摩爾轉(zhuǎn)化率達(dá)到93%，RD產(chǎn)量約為1?051?mg/L。
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