領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：建立快速檢測(cè)和鑒別5?類致瀉大腸埃希氏菌的多重實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）方法。方法：根據(jù)5?類致瀉大腸埃希氏菌的11?組毒力基因eae、stx1、stx2、ipaH、uidA、estla、estlb、aggR、pic、elt、astA建立多重實(shí)時(shí)熒光PCR方法，該方法包括A、B?2?個(gè)反應(yīng)體系，可分別檢測(cè)腸致病性大腸埃希氏菌、腸出血性大腸埃希氏菌、腸侵襲性大腸埃希氏菌、腸產(chǎn)毒大腸埃希氏菌、腸聚集性大腸埃希氏菌，優(yōu)化反應(yīng)體系的引物、探針濃度以及PCR反應(yīng)條件，并對(duì)該方法的靈敏度和特異性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：11?組基因的探針和引物均可特異性地?cái)U(kuò)增相應(yīng)的基因片段，A體系檢測(cè)下限可達(dá)到2.6×104?copies/反應(yīng)，B體系檢測(cè)下限可到達(dá)2.2×104?copies/反應(yīng)。結(jié)論：本研究所建立的多重實(shí)時(shí)熒光PCR方法可以對(duì)同一樣本同時(shí)采用A、B?2?個(gè)反應(yīng)體系進(jìn)行檢測(cè)，不但可以確定待測(cè)樣本是否為大腸埃希氏菌，而且還能判定其致病型別。為大腸埃希氏菌的臨床檢測(cè)、疾病預(yù)防以及爆發(fā)溯源等提供參考。
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