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玉米番茄紅素環(huán)化酶基因的克隆、表達(dá)及功能分析
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 182 發(fā)表時(shí)間: 2023-10-30
作者: 王凡予,何偉偉,李大婧,郭慶啟,羅浩,陸義珠,包怡紅,張鐘元
關(guān)鍵詞: 玉米;番茄紅素環(huán)化酶;基因克隆;顏色互補(bǔ);功能驗(yàn)證
摘要:

從玉米中克隆獲得β-環(huán)化酶(lycopene β-cyclase,LCYb)和ε-環(huán)化酶(lycopene ε-cyclase,LCYe)基因,對(duì)編碼產(chǎn)物進(jìn)行生物學(xué)信息分析,通過體外大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),借助于顏色互補(bǔ)及產(chǎn)物分析實(shí)驗(yàn),探究了玉米LCYb和LCYe的催化功能特性。序列分析結(jié)果顯示,玉米LCYb和LCYe的cDNA全長(zhǎng)分別1 470 bp和1 611 bp,與高粱和小米物種的同源性均在90%以上。通過與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶標(biāo)簽融合表達(dá),成功純化出LCYe和LCYb蛋白。顏色互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)及高效液相產(chǎn)物分析結(jié)果表明,玉米LCYb具有β-環(huán)催化活性,可將番茄紅素兩端環(huán)化形成β-胡蘿卜素,同時(shí)也具有微量的ε-環(huán)活性,可以通過中間體γ-胡蘿卜素生成α-胡蘿卜素;而玉米LCYe具有雙ε-環(huán)活性可以同時(shí)催化番茄紅素兩端形成ε-胡蘿卜素。本研究揭示了玉米番茄紅素環(huán)化酶的催化特性,為探究玉米類胡蘿卜素分子調(diào)控機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

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