領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
生姜蛋白酶能夠特異地水解P2位置是脯氨酸(Pro)的肽和蛋白質(zhì),這種對Pro的特異性使生姜蛋白酶成為一種非常有前途的用于蛋白質(zhì)測序和蛋白質(zhì)中穩(wěn)定結(jié)構(gòu)域識別的工具酶。中國傳統(tǒng)食品“姜撞奶”采用姜汁作為凝乳劑,其中的凝乳因子已被證明是生姜蛋白酶。生姜蛋白酶的凝乳性質(zhì)使之有望成為奶酪生產(chǎn)中小牛皺胃酶的替代品。此外,生姜蛋白酶在工業(yè)上還有更廣闊的應(yīng)用前景。本研究針對生姜蛋白酶的特點,制訂一套簡便有效的純化方案,為進(jìn)一步的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究提供合格的樣品酶。經(jīng)過實驗確立了以下純化方案:將生姜制成丙酮粉,然后用20倍(W/V)0.1mol/L,pH8.0的磷酸緩沖液提取;上清液加硫酸銨至40%飽和度,其間控制pH>7.0,離心棄去沉淀,上清液繼續(xù)加硫酸銨至80%飽和度,離心,取沉淀;將沉淀先對0.1mol/L的氨水透析2h,然后對蒸餾水透析至無SO42-檢出,最后對層析初始緩沖液進(jìn)行延長透析至內(nèi)外離子強(qiáng)度相等;上DEAE-纖維素DE-52柱;層析初始緩沖液為0.01mol/L,pH8.0Tris(含0.5mmol/LDTT,0.2mol/LNaCl),0.05～1mol/LNaCl梯度洗脫,柱1.55.0cm,流速0.75cm3/min,收集速度3ml/管,收集酶活峰,得到在SDS-PAGE上表現(xiàn)為一條帶的樣品C1和C2。
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