領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為在泡盛曲霉中表達(dá)外源基因、克服泡盛曲霉常規(guī)轉(zhuǎn)化法效率低下的瓶頸，本研究擬構(gòu)建采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的泡盛曲霉表達(dá)載體。通過PCR，從糖化酶基因(glaA)高效表達(dá)的泡盛曲霉菌株SG1 基因組DNA 擴增獲得glaA 2.1 kb 啟動子片段(包含信號肽編碼序列)及1.1kb 終止子片段，構(gòu)建了外源基因表達(dá)盒。以根瘤農(nóng)桿菌雙元載體pCAMBIA1302 為基礎(chǔ)，刪除非必需區(qū)段及多余限制酶位點，插入上述外源基因表達(dá)盒及來自絲狀真菌標(biāo)記載體pAN7-1 的潮霉素抗性標(biāo)記，構(gòu)建采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的泡盛曲霉分泌整合型表達(dá)載體pSUAA52am。轉(zhuǎn)化結(jié)果表明：采用原生質(zhì)體法的轉(zhuǎn)化效率為21 個轉(zhuǎn)化子/106 分生孢子，而農(nóng)桿菌介導(dǎo)法可達(dá)1106 個轉(zhuǎn)化子/106 分生孢子，是原生質(zhì)體法的53 倍。構(gòu)建載體成功利用glaA 表達(dá)盒與農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法的高效特性，可為利用泡盛曲霉高效表達(dá)外源基因奠定基礎(chǔ)。
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