領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
對地桿菌α-L-巖藻糖苷酶進(jìn)行分子改造，以提高其酶法合成2’-巖藻糖基乳糖（2’-fucosyllactose，2’-FL）的轉(zhuǎn)化效率。利用易錯(cuò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)構(gòu)建了α-L-巖藻糖苷酶的突變體文庫，篩選得到一個(gè)合成2’-FL轉(zhuǎn)化率提高的突變酶（mPbFuc29A1）。酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明mPbFuc29A1的最適pH值和溫度分別為pH 5.0和40 ℃，最適溫度較野生型PbFuc29A1提高了5 ℃；突變酶水解2’-FL的比活力提高到3 倍，但是水解4-硝基苯基-α-L-巖藻糖苷（4-nitrophenyl-α-L-fucopyranoside，pNP-FUC）和3’-巖藻糖基乳糖（3’-fucosyllactose，3’-FL）的比活力分別降低了22.8%和52.5%。以pNP-FUC和乳糖為底物，采用mPbFuc29A1酶法催化合成2’-FL和3’-FL，轉(zhuǎn)化率分別為23.6%和56.4%，其中2’-FL的轉(zhuǎn)化率較PbFuc29A1提高了9.1%。通過序列及定點(diǎn)突變分析發(fā)現(xiàn)mPbFuc29A1的氨基酸序列中有2 個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變（Asp21Val和Glu266Lys），其中位于loop區(qū)的Glu266Lys可能是mPbFuc29A1底物特異性和轉(zhuǎn)糖苷產(chǎn)物組成發(fā)生改變的關(guān)鍵。優(yōu)良的酶學(xué)特性使mPbFuc29A1在2’-FL合成中具有較大的應(yīng)用潛力。
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