領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：以蒜氨酸酶競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑S-烷基-L-半胱氨酸為配基，制備親和層析膠分離純化蒜氨酸酶。方法：以1,4-丁二醇二縮水甘油醚為活化劑，在堿性條件下，活化載體Sepharose CL-4B，偶聯(lián)半胱氨酸，作為蒜氨酸酶的親和層析膠。低溫粉碎大蒜所得的大蒜液，經(jīng)25% PEG-5000沉淀，得到粗酶。用制得的親和膠分離純化，并利用SDS-PAGE對(duì)酶純度進(jìn)行檢驗(yàn)。結(jié)果：Sepharose CL-4B經(jīng)過1,4-丁二醇二縮水甘油醚活化后，可以偶聯(lián)上半胱氨酸，形成S-烷基-L-半胱氨酸。大蒜液用25% PEG-5000沉淀可以較簡(jiǎn)便地分離出粗酶，經(jīng)制得的親和膠層析，層析蒜氨酸酶產(chǎn)率為0.1296mg.g－1大蒜 ，活力回收達(dá)到68.42%，比活力為9.493U.mg-1，純化倍數(shù)達(dá)到22.28倍。提純的蒜氨酸酶為電泳純，亞基約為52kD。純酶的最適溫度為35℃，最適pH為6.23，Km=9.845 mmol.L-1，Vmax=24.93 U.mg-1。結(jié)論：以S-烷基-L-半胱氨酸為配基制得適合于蒜氨酸酶分離純化的親和載體。
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