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—— 中國食品雜志社
從單克隆雜交瘤細胞出發(fā)，構建抗3-氨基-2-噁唑烷酮（3-amino-2-oxazolidinone，AOZ）衍生物單鏈抗體基因，并對其蛋白質進行理化性質分析及結構預測和活性鑒定。首先以呋喃唑酮代謝物AOZ衍生物單克隆抗體雜交瘤細胞1D2為原料，提取總RNA后克隆重鏈（VH）、輕鏈（VL）可變區(qū)基因，然后使用重疊延伸聚合酶鏈式反應技術用連接肽(G4S)3將VH、VL基因連接構建抗AOZ衍生物單鏈抗體基因，經(jīng)測序后采用生物信息軟件對抗體編碼的氨基酸序列進行推導并展開生物信息學分析，再將此基因與Plip6/GN表達載體連接后進行表達并采用直接競爭酶聯(lián)免疫分析法（direct competitive enzyme-linked immunosorbent assay，dcELISA）鑒定其活性。結果表明：抗AOZ衍生物單鏈抗體基因全長750?bp，編碼250?個氨基酸，相對分子質量為27?012.20，理論等電點為9.13，屬于堿性氨基酸；其二級結構預測結果顯示抗體蛋白含20?處α-螺旋、25?處β-轉角、114?處無規(guī)卷曲、91?處延伸帶結構；三級結構預測的正面俯視圖顯示重、輕鏈由連接肽相連形成一個“環(huán)桶狀”結構，側面顯示為“口袋狀”，這與常規(guī)單鏈抗體的結構特征一致，dcELISA結果也顯示該抗體具有良好的抗原結合活性。本研究為后續(xù)AOZ殘留檢測免疫分析方法的建立及抗AOZ衍生物單鏈抗體的改造奠定一定基礎。
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