領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
分離篩選高產(chǎn)轉(zhuǎn)糖基活性β-半乳糖苷酶的乳源微生物，為高效合成低聚半乳糖（galacto-oligosaccharides，GOS）提供新酶源。以添加5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-Gal）的乳糖為碳源的乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基（MRS）進(jìn)行初級(jí)分離篩選，以產(chǎn)酶菌株粗酶液催化乳糖轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)產(chǎn)物的薄層層析進(jìn)行復(fù)篩，單因素優(yōu)化最佳產(chǎn)酶條件和轉(zhuǎn)糖基反應(yīng)條件，硫酸銨分級(jí)沉淀純化β-半乳糖苷酶并對(duì)其酶學(xué)特性進(jìn)行初步分析。篩選獲得產(chǎn)轉(zhuǎn)糖基活性β-半乳糖苷酶乳酸菌20?株，選擇產(chǎn)酶水平較高、轉(zhuǎn)糖基活性最強(qiáng)的產(chǎn)β-半乳糖苷酶菌株L6進(jìn)行進(jìn)一步研究。生理生化和分子生物學(xué)鑒定確定L6菌株為L(zhǎng)actobacillus kefiri。該菌株在2?g/100?mL乳糖、1?g/100?mL氮源（蛋白胨、牛肉膏和酵母浸粉）及初始pH?5.5的條件下，37?℃培養(yǎng)20?h，產(chǎn)酶水平最高可達(dá)（3.81±0.02）U/mL。L6菌株所產(chǎn)β-半乳糖苷酶催化反應(yīng)的溫度范圍較寬，45～70?℃均能保持50%以上相對(duì)酶活力。以45?g/100?mL乳糖為底物，該酶在65?℃、pH?7.0條件下，反應(yīng)4?h生成轉(zhuǎn)移二糖的得率為13.51%（m/m，下同），轉(zhuǎn)移三糖為13.85%，轉(zhuǎn)移三糖以上的GOS為4.15%。
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