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裂殖壺菌鯊烯合酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)
來(lái)源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 112 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 朱路英，朱清華，張學(xué)成
關(guān)鍵詞: 原核表達(dá)|裂殖壺菌|鯊烯合酶|cDNA克隆
摘要:

為探討裂殖壺菌烯合酶基因的克隆，以及在大腸桿菌中的表達(dá)。采用簡(jiǎn)并引物與RACE 相結(jié)合的方法從裂殖壺菌(Schizochytrium limacinum)中克隆出鯊烯合酶基因。分析表明該基因的cDNA 全長(zhǎng)包括1672 個(gè)核苷酸，編碼一個(gè)含446 個(gè)氨基酸的開(kāi)放閱讀框；在裂殖壺菌中以單拷貝的形式存在。同源分析顯示裂殖壺菌鯊烯合酶的氨基酸序列中含有5 個(gè)保守基序。將裂殖壺菌鯊烯合酶的cDNA 序列連接到原核表達(dá)載體pGEX-4T-3 上構(gòu)建融合表達(dá)載體，并在大腸桿菌BL21 中進(jìn)行IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE 及Western blotting 分析結(jié)果顯示，誘導(dǎo)表達(dá)出的融合蛋白主要以包涵體的形式存在，其相對(duì)分子質(zhì)量與預(yù)期相符；且融合蛋白具有一定的免疫原性。

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