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多重PCR-DHPLC檢測4種主要致腹瀉性大腸埃希氏菌方法的建立與應(yīng)用
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 156 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 徐義剛,崔麗春*,李蘇龍,曹際娟,姜艷春,張子群,劉新亮
關(guān)鍵詞: 致瀉性大腸桿菌|聚合酶鏈反應(yīng)|變性高效液相色譜|檢測
摘要:

腸出血性大腸桿菌(EHEC)、腸致病性大腸桿菌(EPEC)、產(chǎn)腸毒素性大腸桿菌(ETEC)和腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)是引起腹瀉、危害食品安全和人類健康的4 種主要大腸桿菌。本實驗基于ETEC LT 基因、EPEC bfpA 基因、EHEC O 抗原基因和EIEC 侵襲性質(zhì)粒基因序列,設(shè)計了4 對特異性引物,利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)和變性高效液相色譜(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技術(shù),通過體系優(yōu)化,建立了致腹瀉性大腸桿菌多重PCR-DHPLC 檢測方法,達(dá)到同時檢測4 種致病菌的目的。該方法靈敏度高,最低檢測限為EHEC 6 × 101拷貝/μL、ETEC 1.3 × 102 拷貝/μL、EPEC 9 × 101 拷貝/μL、EIEC 7 × 101 拷貝/μL。特異性試驗表明,對22種共41 株細(xì)菌進(jìn)行檢測,所試6 株致腹瀉性大腸桿菌均為陽性。實踐證明,該方法具有良好的實用性,可用于ETEC、EPEC、EHEC 和EIEC 的單一或混合感染的檢測。

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