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食品中單增李斯特菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)
來(lái)源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 213 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 易海華,祝長(zhǎng)青,宋陽(yáng)威,孫慧宇,房 超,王云飛,徐 波,吳萍蘭,徐 政,徐繼承,趙金偉
關(guān)鍵詞: 單增李斯特菌|環(huán)介導(dǎo)恒溫基因擴(kuò)增方法|快速檢測(cè)
摘要:

目的:建立一種快速、簡(jiǎn)單地檢測(cè)食品中單增李斯特菌的環(huán)介導(dǎo)恒溫基因擴(kuò)增方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),并初步建立熒光定量LAMP檢測(cè)單增李斯特菌的方法。方法:根據(jù)LAMP方法的原理,設(shè)計(jì)LAMP檢測(cè)引物,建立LAMP檢測(cè)方法,同時(shí)對(duì)方法的特異性、靈敏度、重復(fù)性及初始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值與反應(yīng)時(shí)間之間的線性關(guān)系進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果:使用LAMP引物可以在0.5h內(nèi)完成檢測(cè)工作;LAMP檢測(cè)技術(shù)的靈敏度高出聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)技術(shù)100倍以上,檢出限達(dá)到1.72×101拷貝/反應(yīng),與其他食源性致病菌無(wú)交叉反應(yīng),平均實(shí)驗(yàn)間變異系數(shù)小于5%;反應(yīng)時(shí)間與初始模板濃度的常用對(duì)數(shù)值有良好的線性關(guān)系(R2=0.9994)。結(jié)論:本方法具有快速、靈敏、特異、操作簡(jiǎn)單、設(shè)備要求低的特點(diǎn),具有廣闊的應(yīng)用前景。

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