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重組融合蛋白MBP-BSH在大腸桿菌中的表達及其純化、功能鑒定
來源:食品科學網 閱讀量: 142 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 黃 茜,黃 璐,潘道東,楊 瑤,*
關鍵詞: 融合蛋白MBP-BSH|表達純化|功能鑒定|膽鹽水解酶
摘要:

選擇IF2融合標簽,另選擇含SUMO、GST、NusA和MBP融合標簽的質粒構建表達載體。SDS-PAGE電泳結果顯示,重組菌Escherichia Rosetta(DE3) (pLS932-BSH)的誘導表達細胞提取液上清出現了明顯的融合蛋白MBP-BSH條帶,經誘導表達條件優(yōu)化后,MBP-BSH可溶性大幅度提高。用Ni-NTA Resin和Amylose Resin分別進行目標蛋白純化,結果顯示前者效果更好,并且C端融合His-Tag更有利于其與Ni離子結合,MBP-BSH蛋白純化量更大,雜帶更少。茚三酮顯色反應測定酶活力,結果顯示純化后的MBP-BSH的酶比活力為2.4282U/mg。

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