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黑曲霉耐酸性α-半乳糖苷酶的分離及其酶學性質
來源:食品科學網(wǎng) 閱讀量: 183 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 王劍鋒,王璋,李江,饒軍
關鍵詞: 雙水相萃取|蜜二糖|對硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷|同二聚體|α-半乳糖苷酶
摘要:

采用耐酸性黑曲霉(Aspergillus niger L.)發(fā)酵豆渣產α-半乳糖苷酶,粗酶液依次經過聚乙二醇6000-KH2PO4雙水相萃取、Sephadex G-100凝膠過濾,獲得了電泳純的α-半乳糖苷酶,純化倍數(shù)為36.4,總酶活力回收率達到70%。凝膠過濾表明:該酶表觀分子質量為125kD,SDS-PAGE顯示其分子質量為58.5kD。該酶水解對硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷的最適pH值為4.0,最適溫度為65℃,表觀Km值為0.915mmol/L,表觀kcat/Km值為1.07×105L/(mol·s);水解蜜二糖的表觀Km、kcat/Km值分別是21.0mmol/L、9.96×103L/(mol·s);對棉子糖只有微弱的水解作用。水解活性受多種金屬離子的普遍抑制,其中Fe3+、Fe2+、Mn2+、Hg+等強烈抑制酶活力。該酶活力在pH1.5~8.2保持穩(wěn)定,在60℃時保溫60min,剩余酶活力達到了60%,是一種熱穩(wěn)定酸性α-半乳糖苷酶。

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