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重組酶FLP在弱氧化葡糖桿菌中的表達及應(yīng)用
來源：食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 162 發(fā)表時間: 2017-06-07
作者: 劉靜文，李天明，杜紅燕，馮惠勇
關(guān)鍵詞: 弱氧化葡糖桿菌；FLP/FRT；位點特異性重組；啟動子；基因敲除
摘要:

本實驗借助寬宿主載體pBBR1MCS-5，構(gòu)建在弱氧化葡糖桿菌（Gluconobacter suboxydans）中表達FLP重組酶的表達載體，轉(zhuǎn)化弱氧化葡糖桿菌，獲得陽性轉(zhuǎn)化子；采用兩步法RT-PCR（reverse transcription-polymerasechain reaction）驗證，結(jié)果表明：flp基因在宿主細胞中轉(zhuǎn)錄表達；將pBBR1MCS-psldh-flp重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至帶有四環(huán)抗性的突變菌株JGDH－，PCR驗證表明帶有FTR位點的抗性標記得到有效刪除。重組酶FLP在Gluconobactersuboxydans的表達提供了一種循環(huán)使用選擇標記基因進行多個位點基因敲除或置換的方法。

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