領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
為提高纖維素的降解效率，將兩種不同的纖維素酶基因在乳酸桿菌中融合表達(dá)，實現(xiàn)雙纖維素酶在乳酸桿菌中的高效表達(dá)。根據(jù)兩纖維素酶的基因序列設(shè)計兩對引物，并在兩基因間引入一段連接肽。通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）分別擴(kuò)增得到兩纖維素酶基因CelL15和CelL73，將其融合后連接到乳酸桿菌分泌性表達(dá)載體pMJ67中，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pMJ-CelL15-CelL73，電轉(zhuǎn)化入乳酸桿菌Lactobacillus casei，利用紅霉素MRS平板篩選陽性克隆，通過PCR驗證獲得了分泌表達(dá)雙纖維素酶的重組乳酸桿菌。電泳實驗結(jié)果表明重組乳酸桿菌成功表達(dá)了1 個約為83 kD的融合蛋白。平板酶活力檢測發(fā)現(xiàn)重組乳酸桿菌能明顯降解底物中的羧甲基纖維素鈉，培養(yǎng)液上清中纖維素酶酶活力可達(dá)1.25 U/mL。
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