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—— 中國食品雜志社
目的：構建河南華溪蟹金屬硫蛋白（metallothionein，MT）分泌型表達載體并誘導其可溶表達。方法：采用基因重組技術，將河南華溪蟹MT基因亞克隆至堿性磷酸鹽啟動子（alkaline phosphatase promoter，phoA）分泌型原核表達載體，轉化大腸桿菌BL21（DE3），通過低磷酸鹽誘導重組蛋白表達，經Ni2+螯合柱分離純化后，利用紫外光譜掃描分析、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）及Western blotting檢測鑒定重組MT。結果：phoA-MT分泌型表達載體構建成功，工程菌經低磷酸鹽誘導后重組MT以可溶形式獲得表達，紫外光譜掃描和Western blotting證實表達產物的正確性，SDS-PAGE分析其純度較高，主要以單體和二聚體的形式存在，其分子質量分別約為7.5、15 kD。結論：成功實現(xiàn)了河南華溪蟹MT的重組表達。
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