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—— 中國食品雜志社
本實驗主要對鰱魚半胱氨酸蛋白酶抑制因子Cystatin進行原核表達(dá)和純化鑒定，并研究重組Cystatin對銅綠假單胞菌的抑菌效果。首先用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside，IPTG）誘導(dǎo)轉(zhuǎn)入pET-30-Cystatin的E.coli BL21（DE3）表達(dá)重組Cystatin蛋白，經(jīng)Ni2+-NTA鎳離子親和層析對其進行純化，該重組蛋白在十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳上顯示單一條帶，分子質(zhì)量約20.6 kD，在TSK-GEL G2000SW凝膠過濾高效液相色譜上呈單一活性峰，純度為94.27%，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算其分子質(zhì)量為20.9 kD；其次，利用抑制劑滴定曲線法，以偶氮酪蛋白為底物，確定重組Cystatin對木瓜蛋白酶（45.375 μmol）的一個抑制活性單位為0.718 μg；最后通過濾紙片擴散法鑒定鰱魚重組Cystatin對銅綠假單胞菌的抑菌效果，結(jié)果表明Cystatin的添加量為20、60、120、200 U/片時，抑菌圈直徑分別為8、9、13、26 mm。鰱魚重組Cystatin對銅綠假單胞菌的抑菌效果呈劑量依賴關(guān)系。
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