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應(yīng)用LNA-TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)大米制品中轉(zhuǎn)基因成分
來源:食品科學(xué)網(wǎng) 閱讀量: 226 發(fā)表時(shí)間: 2017-06-07
作者: 潘 廣,章桂明,陳枝楠,程穎慧,向才玉,包先雨,凌杏園
關(guān)鍵詞: 大米制品;鎖核酸;鎖核酸探針;實(shí)時(shí)熒光PCR
摘要:

大米制品中痕量轉(zhuǎn)基因成分的檢測(cè)需要特異和超靈敏的檢測(cè)方法。本研究以行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中轉(zhuǎn)基因大米篩查位點(diǎn)CaMV35S啟動(dòng)子、NOS終止子和Cry1A基因?yàn)槟繕?biāo),利用在常規(guī)TaqMan探針中摻入鎖核苷酸提高探針退火溫度和雜交特異性等特點(diǎn),經(jīng)比較以上位點(diǎn)不同LNA-TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)檢測(cè)效果,建立了針對(duì)上述篩查位點(diǎn)的基于LNA-TaqMan探針的新型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。該方法特異性強(qiáng),檢測(cè)靈敏度超高;與普通TaqMan實(shí)時(shí)熒光PCR方法相比,其反應(yīng)Ct值可提前1~3 個(gè)循環(huán)(Cry1A位點(diǎn)除外),檢測(cè)低限可達(dá)3 pg。該檢測(cè)方法可以用以檢測(cè)大米制品中常規(guī)實(shí)時(shí)熒光PCR難以檢測(cè)到的痕量轉(zhuǎn)基因大米成分。

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