領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國(guó)食品雜志社
目的：建立一種用于單核細(xì)胞增生李斯特菌的實(shí)時(shí)熒光賴(lài)解旋酶恒溫核酸擴(kuò)增（helicase-dependentisothermal DNA amplification，HDA）快速檢測(cè)方法。方法：針對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特菌hly基因序列設(shè)計(jì)引物對(duì)，基于熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀的平臺(tái)，提取單核細(xì)胞增生李斯特菌基因組DNA，以此作為模板，優(yōu)化反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間及引物濃度。利用單核細(xì)胞增生李斯特菌及10 株對(duì)照菌株，并與實(shí)時(shí)熒光PCR對(duì)比，來(lái)驗(yàn)證實(shí)時(shí)熒光HDA方法的特異性和靈敏度，并初步用于樣品檢測(cè)。結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光HDA體系的最適引物濃度為0.075 μmol/L，反應(yīng)溫度及反應(yīng)時(shí)間為65 ℃、80 min（40 個(gè)循環(huán)），具有良好的特異性和靈敏度。結(jié)論：建立了一種特異性強(qiáng)、靈敏度高的實(shí)時(shí)熒光HDA檢測(cè)單核細(xì)胞增生李斯特菌的方法。
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