領(lǐng)學(xué)術(shù)科研之先，創(chuàng)食品科技之新
—— 中國食品雜志社
本實驗首先從花生中提取總RNA，利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)克隆了花生過敏原蛋白Ara h 6全cDNA，并以此為模板擴增出Ara h 6目的基因。將目的基因與pMD19-T Simple質(zhì)粒進行重組后轉(zhuǎn)入BL21（DE3）宿主表達菌中，異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導(dǎo)產(chǎn)物表達，并利用鎳離子親和層析純化表達產(chǎn)物。DNA測序結(jié)果顯示Ara h 6基因片段全長為438 bp，編碼145 個氨基酸，與已知該蛋白DNA序列97%相同；十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果顯示表達產(chǎn)物分子質(zhì)量為24 kD，與融合組氨酸標(biāo)簽的重組Ara h 6蛋白理論分子質(zhì)量相符；質(zhì)譜鑒定結(jié)果表明重組蛋白的一級結(jié)構(gòu)與天然Ara h 6匹配度為100%；Western blotting結(jié)果顯示融合蛋白能夠為抗Ara h 6多克隆抗體所識別，具有免疫原性。
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